CCK8實(shí)驗(yàn)心得-實(shí)驗(yàn)方法_MedChemExpress

產(chǎn)品概述
Cell Counting Kit-8，簡稱 CCK-8 試劑盒，是一種基于 WST-8 而廣泛應(yīng)用于
細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測試劑盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分。WST-8 在
電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色
的formazan  。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，
則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺 (生成的 formazan 量) 和細(xì)胞數(shù)
目呈線性關(guān)系

計(jì)算公式

細(xì)胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
As: 實(shí)驗(yàn)孔吸光度 (含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液) ；
Ac: 對照孔吸光度 (含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含藥物) ；
Ab: 空白孔吸光度 (含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含細(xì)胞、藥物) 。

Cell line : HEK293
Medium : DMEM, 10% FBS
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

Cell line : U87, SK-HEP1
Medium : DMEM, 10% FBS
Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

注：如果待測藥物有氧化性或還原性，可在加入 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)
基，去掉待測藥物的影響。當(dāng)待測藥物影響比較小的情況下可以不更換培
養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入待測藥物后的空白吸收即可。
WST-8 是 MTT 的一種升級替代產(chǎn)品，和 MTT 或其它 MTT 類似產(chǎn)品，如
XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。第一，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原
生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶劑來溶解；而 WST-8 和
XTT 、MTS 產(chǎn)生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。第
二，WST-8 產(chǎn)生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠。第四，WST-8
和 MTT、XTT 等相比線性范圍更寬，靈敏度更高，并且更加穩(wěn)定。
WST-8 對細(xì)胞無明顯毒性。加入 CCK-8 溶液顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)
用酶標(biāo)儀讀板，檢測時(shí)間更加靈活，便于確定最佳測定時(shí)間。