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CCK-8/WST-8試劑盒_MCE

發(fā)布日期:2018-03-26   來源:MedChemExpress   瀏覽次數:0
核心提示:產品概述Cell Counting Kit-8,簡稱 CCK-8 試劑盒,是一種基于 WST-8 而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射
產品概述
Cell Counting Kit-8,簡稱 CCK-8 試劑盒,是一種基于 WST-8 而廣泛應用于
細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測試劑盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到細胞樣品中,不需要預配各種成分。WST-8 在
電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色
的formazan  。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,
則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺 (生成的 formazan 量) 和細胞數
目呈線性關系

注意事項
1. CCK-8 的培養(yǎng)時間一般為 1-4 小時,但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼
觀察顯色程度,根據細胞種類而定,需要摸索條件,CCK-8 的最佳反應時
間以具體顯色的最佳時間為準。
2. 使用 96 孔板進行檢測時,如果細胞培養(yǎng)時間較長,一定要注意蒸發(fā)問
題。一方面,由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā),可以采取棄用周圍一圈
的辦法,改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液;另一方面,可以把 96 孔板置
于靠近培養(yǎng)箱內水源的地方,以緩解蒸發(fā)。
3. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,所以還原劑 (例如一些抗氧
化劑) 會干擾檢測,如果待檢測體系中存在較多的還原劑,需設法去除。
用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。
4. 加入藥物中如含有金屬,對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為 1 mM 的氯化
亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應,使靈敏度降
低。如果終濃度是 10 mM 的話,將會 100% 抑制。
5. 培養(yǎng)基中的酚紅不會影響實驗結果,酚紅的吸光度可以在計算時,通過
扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。
6. 本產品可以檢測 ,但不能檢測酵母細胞。向 100 μL 培養(yǎng)液
中加入 10 μL CCK-8 溶液,并培養(yǎng) 1-4 小時或過夜。
7. CCK-8 試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續(xù)反應使溶
液顏色不斷加深,OD 值不斷增加 (注: 活細胞內的脫氫酶是持續(xù)產生的) 。
8. 要測定細胞的具體數量,建議同時做標準曲線。
9. 建議采用多通道移液器,以減小平行孔間的差異。
10. 以下方法可以終止 CCK-8 反應 (96 孔板) :
(a). 在顯色反應后,將培養(yǎng)板放置 4°C 冰箱內。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl
溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸鈉) 溶液。
注意:反應停止后,應在 24 小時內測定。
11. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不
得用于食品或藥品。
12. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
 
 
 
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